SuperSep Phos-tag（tm）丙烯酰胺預(yù)制膠,內(nèi)含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預(yù)制膠中含有鋅作為金屬離子，無需特異性磷酸化抗體或者同位素標記，在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好，結(jié)果條帶清晰。預(yù)制膠打開包裝即可直接使用。
SuperSep Phos-tag™丙烯酰胺預(yù)制膠
SuperSep Phos-tag™丙烯酰胺預(yù)制膠,內(nèi)含50uMPhos-tag丙烯酰胺,可用于磷酸化蛋白的分離。預(yù)制膠中含有鋅作為金屬離子，無需特異性磷酸化抗體或者同位素標記，在中性凝膠緩沖液中保存穩(wěn)定性很好，結(jié)果條帶清晰。預(yù)制膠打開包裝即可直接使用。根據(jù)實驗條件,Phos-tag預(yù)制膠有多款丙烯酰胺濃度和孔數(shù)可選,提供專門適合BioRad和Life Technologies電泳槽尺寸的預(yù)制膠。
Phos-tag™磷酸化親和電泳原理
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠產(chǎn)品特點：
■ 即開即用 - 節(jié)約zui寶貴的時間
■ 根據(jù)磷酸化程度分離磷酸化蛋白
■ 分離效果好，條帶清晰
■ 無需磷酸化特異性抗體和放射性同位素標記
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠案例：
(1）分離磷酸化和去磷酸蛋白
| [電泳緩沖液]
Tris-*-SDS 緩沖液
[電泳樣品]
條帶1: 未處理白蛋白
條帶2: 去磷酸化白蛋白
[電泳條件] 20 mA, 70分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水
白蛋白(Wako# 010-17071)的去磷酸化，采用的是堿性磷酸酶(日本基因公司,貨號319-02661)。條帶遷移證明去磷酸化完成。 |
(2）去磷酸化過程
| [電泳緩沖液]
Tris-*-SDS 緩沖液
[電泳樣品]
條帶1: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 0 分鐘)
條帶2: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 15 分鐘)
條帶3: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 30 分鐘)
條帶4: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 45 分鐘)
條帶5: β-酪蛋白 (堿性磷酸酶處理, 60 分鐘)
[電泳條件] 35 mA, 60分鐘
[染色] CBB快速染色
[脫色] 去離子水
β-酪蛋白按時間序列進行去磷酸化。結(jié)果證明磷酸化和去磷酸化β-酪蛋白分離開了。同時驗證去磷酸化程度與時間相關(guān)。 |
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠產(chǎn)品列表
1、適用于Bio-Rad電泳槽的預(yù)制膠
| Product Name | Wako Cat. No. | Pkg. Size |
|---|
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm | 198-17981 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 83 x 100 x 3.9 mm | 195-17991 | 5 gels |
2、適用于Life-technology電泳槽的預(yù)制膠
| Product Name | Wako Cat. No. | Pkg. Size |
|---|
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm | 192-18001 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 wells 100 x 100 x 6.6 mm | 199-18011 | 5 gels |
3、適用于wako電泳槽的預(yù)制膠（>90 x 85 x 1 mm）
| Product Name | Well | Wako Cat. No. | Pkg. Size |
|---|
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 6% | 13 wells | 192-17401 | 5 gels |
17 wells | 199-17391 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 7.5% | 13 wells | 195-17371 | 5 gels |
17 wells | 192-17381 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10% | 13 wells | 193-16711 | 5 gels |
17 wells | 190-16721 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5% | 13 wells | 195-16391 | 5 gels |
17 wells | 193-16571 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15% | 13 wells | 193-16691 | 5 gels |
17 wells | 196-16701 | 5 gels |
| SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5% | 13 wells | 197-16851 | 5 gels |
17 wells | 194-16861 | 5 gels |
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠使用須知
樣品制備：
Phos-tag SDS-PAGE對于蛋白樣品中的雜質(zhì)非常敏感，尤其是螯合劑，釩酸，無機鹽，表面活性劑這類物質(zhì)。
強烈建議在Phos-tag SDS-PAGE之前通過TCA沉淀或滲析法降低雜質(zhì)含量。
轉(zhuǎn)膜前處理：
另一個必須的步驟是在轉(zhuǎn)膜前，用EDTA去除凝膠中的金屬離子（Mn2+或者Zn2+）； 該步驟可提高蛋白的轉(zhuǎn)膜效率。
- 分別準備10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 兩種1x transfer buffer。
- 將凝膠浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分鐘，溫和搖晃。更換新緩沖液，重復(fù)3次。
- 將凝膠浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分鐘，溫和搖晃。
- 轉(zhuǎn)膜操作*。
* 建議用濕法轉(zhuǎn)膜，以提高轉(zhuǎn)膜效率。
SuperSep Phos-tag丙烯酰胺預(yù)制膠質(zhì)量控制
每一批SuperSep Phos-tag™，出廠前均據(jù)產(chǎn)品規(guī)格進行測試，以保證可分離磷酸化和非磷酸化蛋白，且分離程度在正常參數(shù)內(nèi)。
Phos-tag(TM)其它相關(guān)產(chǎn)品
- Phos-tag 丙烯酰胺
- Phos-tag 瓊脂糖
- Phos-tag 質(zhì)譜分析試劑盒
- Phos-tag *
- SuperSep Phos-tag 預(yù)制膠
- Phos-tag 瓊脂糖吸管
相關(guān)資料
分析磷酸化蛋白的新方法 - WAKO 磷酸化蛋白電泳試劑Phos-tag 系列
