細胞培養實驗中,經常會遇到諸如外源污染、真菌污染、支原體污染、操作不當等各種問題,為解救細胞,需要針對不同問題對癥下藥,那么,細胞培養時產生細菌污染該如何解決呢?
細菌是一種原核細胞微生物,其大小以微米(μm)計。常見的污染細菌有革蘭氏陰性菌和大腸桿菌、假單胞菌等,革蘭氏陰性菌中白色葡萄球菌等比較常見。
一旦發生細菌污染較易發現,多數情況下培養液短期內顏色變黃,表明有大量酸性物質產生,出現明顯混濁現象;有時靜置的培養液液體初看不混濁,但稍加振蕩,就有很多混濁物漂起。倒置顯微鏡下觀察,可見培養液中有大量圓球狀顆粒漂浮。必要時可取少量培養液涂片染色檢查以證實細菌種類;有的培養液改變不明顯而又疑有污染,可取出少量培養液用普通肉湯接種或用未加雙抗藥物的培養液接種,也可取10ml細胞懸液以100rpm離心5min,沉淀中加入無抗生素的培養液2ml,置于37℃培養,24h可得結果。
污染后細胞發生病理改變,胞內顆粒增多、增粗,最后變圓脫落死亡,造成試驗失敗和細胞株(系)丟失。一旦發現細胞被細菌污染,需要采取如下解決方案:
(1) 丟棄所有已經污染的細胞和培養基;
(2) 培養環境用新潔爾滅擦拭且UV滅菌24小時;
(3) 培養試劑中加入P/S雙抗。
此外,在細胞培養時應盡可能使用一次性耗材及成品培養基,以減少細菌污染的可能性。
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