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應(yīng)用濾袋技術(shù)測定中性洗滌纖維（NDF）的方法

ANKOM A200i型半自動纖維分析儀

A. 試劑

（a）稱取30.0g十二烷基硫酸鈉（USP）；18.61g 乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）；6.81g四硼酸鈉（Na2B4O7）十水；4.56g*（Na2HPO4）-無水；10.0 ml三甘醇C6H14O4；全部溶解在1L水中，適當(dāng)?shù)臄嚢韬图訜嵊兄谌芙狻z查適當(dāng)?shù)?/span>pH在6.9—7.1。

（b） α-*（Alpha-amylase） –熱穩(wěn)定細(xì)菌α-*：活性為17,400 單位/ mL。1個活性單位表示能將1 mg可溶性淀粉用30 min水解。

（c） 無水亞硫酸鈉（Na₂SO₃）。

（d） 丙酮：無色，并且蒸發(fā)后無殘渣。

B. 安全注意

（a） 丙酮易燃，操作時應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，避免吸入或與皮膚接觸。將濾袋放入烘箱之前，要確保濾袋*干燥，丙酮*揮發(fā)。

（b） 十二烷基硫酸鈉對黏膜有刺激，因此操作時要帶防塵口罩和手套。

C.設(shè)備

（a） 消化裝置- ANKOM A200i 纖維分析儀。

（b） 濾袋- ANKOM F57濾袋。

（c） 封口機

（d） 干燥器

（e） 分析天平-至0.1mg

（f） 電熱干燥箱

（g） 耐溶劑記號筆

D. 步驟

（a） 濾袋和樣品的準(zhǔn)備

1） 用耐溶劑的記號筆給濾袋編號，稱重（m ₁）。

2） 直接準(zhǔn)確稱取0.5g （± 0.05 g 制備好的樣品 （m ） 于濾袋中。樣品需要粉碎過1mm篩。

3） 在距離濾袋上邊緣大約5 mm用封口機封口。然后將樣品在濾袋中展平，均勻分布。

4） 至少取一個空白濾袋（C₁），同時做空白測定。

5） 一次zui多可以在濾袋架上放24個濾袋。無論放置濾袋數(shù)量多少，9層濾袋架上托盤要全部使用，每層放三個濾袋。層與層之間錯開120度。然后將裝有濾袋的支架放入纖維分析儀消煮器中，然后在頂部將金屬壓錘放上，以確保消煮過程中不浮起。

6） 樣品含有大豆產(chǎn)品或脂肪超過5% ，將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒，蓋好蓋子。搖動容器10次，浸泡10 min。然后更換新的丙酮，重復(fù)上述操作一次。zui后將濾袋取出，放在網(wǎng)篩上涼干。

例外：烘烤大豆，由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改進(jìn)后的下面脫脂方法。將裝有樣品的濾袋放入帶蓋玻璃容器中，加丙酮使濾袋*浸沒，蓋好蓋子。搖動容器10次，然后更換新的丙酮，浸泡12h。取出濾袋，放在網(wǎng)篩上涼干。

（b） 當(dāng)處理24個濾袋時，向2000 mL中性洗滌劑溶液中加無水亞硫酸鈉20 g （0.5 g/50 mL ND 溶液） 和 4.0 mL 熱穩(wěn)定 alpha-amylase。 讓無水亞硫酸鈉在溶液中充分溶解。向容器中加入該溶液。如果處理樣品少于20 個濾袋，按照每個濾袋加100 mL酸溶液，但不能少于1500 mL，確保濾袋托盤*浸沒。

（c） 打開攪拌和加熱開關(guān)，確保濾袋支架攪拌正常。蓋上蓋子并*密封好。 儀器將加熱并維持溶液溫度100°C。 設(shè)置處理時間75 min，包括加熱升溫時間。

（d） 消煮結(jié)束，關(guān)上加熱和攪拌開關(guān)，打開排液閥（開始要慢一點），在打開蓋子之前確保廢液排放管與廢液容器安全連接，一定將熱的溶液排完。

*警示：消煮器中的溶液是有壓力的。 在打開蓋子之前一定將廢液閥打開以釋放壓力。

（e） 溶液排完后，打開蓋子，關(guān)閉排液閥，加2000 mL （70°C~90°C） 蒸餾水，并且第1和第2次淋洗時同時加4.0 mL α-*，放下蓋子，但不旋緊。打開攪拌開關(guān)（不打開加熱開關(guān)）攪拌3~5 min。排掉廢液，重復(fù)2次，共淋洗3次。

（f） zui后一次淋洗后，加冷的自來水以操作和使冷卻容器，為下輪測定做好準(zhǔn)備。排干水，從容器中取出帶濾袋的支架。將濾袋從濾袋支架上取下來，輕輕擠壓去掉多余的水。然后將濾袋放入250 mL 燒杯中，加丙酮至覆沒濾袋，浸泡3~5 min ，然后取出并輕輕擠壓去掉多余的丙酮。

（g） 在通風(fēng)櫥中展開濾袋，讓其自然干燥。*干燥后放入102°C±2°C 烘箱烘干4小時。

*警告：在丙酮*揮發(fā)掉之前不能把濾袋放入烘箱中。

（q） 從烘箱中取出濾袋，直接放入干燥器中冷卻至室溫，然后稱重（m ₂）。

E. 計算

試樣中中性洗滌纖維質(zhì)量分?jǐn)?shù)按以下公式計算。

NDF （%） = （m2- （m1 x C1）） x 100 / m

其中： m1 為空袋質(zhì)量，g；m為樣品質(zhì)量，g；m2 為提取處理后樣品殘渣+濾袋質(zhì)量，g；C1 為空白袋子校正系數(shù)（烘干后質(zhì)量/原來質(zhì)量）。