厭氧菌臨床檢驗的重要性
厭氧菌檢驗是臨床微生物檢驗的重要組成部分。在無氧(或少氧)條件下,或氧化還原電勢低的條件下才能繁殖的細菌稱為厭氧菌。
厭氧菌在人體腸道、口腔、上呼吸道、泌尿生殖道等處的正常菌群中占有優勢,如長期使用廣譜抗生素、激素、免疫抑制劑等,在發生菌群失調或機體免疫力下降或細菌進入非正常寄居部位時,厭氧菌可能發生嚴重的甚至致死的內源性厭氧菌感染。厭氧菌感染常發生在深部傷口,但也可伴兼性厭氧菌和需氧菌侵犯人體任何器官和組織,當深部膿腫、敗血癥等常規細菌學檢查陰性時,往往源于厭氧菌感染。據文獻報道,牙周炎及牙根管炎厭氧菌感染率高達96.67%~100%[1,2];肛周、腹部和肺部厭氧菌感染率也比較高,厭氧菌和需氧菌混合性感染率達72%~91.7%[1,3];肺部感染和肺膿腫厭氧菌感染率為40.1%~84.2%[4,5];病原菌以革蘭陰性厭氧桿菌居多,其中類桿菌屬為優勢菌;機體免疫功能低下時,如癌癥、骨髓移植等患者容易引發菌血癥[6-8];重癥監護病房的患者因長期住院,容易發生醫源性感染。在婦產科各種感染性疾病中有100%,直腸周圍膿腫有77%可檢出厭氧菌,而且有相當一部分病例是單一的厭氧菌感染[1]。抗生素相關性腹瀉中難辨梭菌的感染常通過接觸方式傳播,發生醫院感染暴發流行,嚴重者導致死亡[9]。所以,對厭氧菌檢驗應給予高度重視。
為全面協助臨床診斷,防止感染性疾病被漏診或誤診,現大部分醫院微生物檢驗室開展厭氧菌鑒定與藥敏。
要成功分離厭氧菌首先是正確地選擇標本:下列細菌學指征有助于選擇標本做厭氧培養:(1)深部傷口或軟組織膿腫的膿液,特別是伴有惡臭或含有硫磺顆粒時。(2)可疑為氣性壞疽或少見的嚴重產氣或壞死性感染所取得的壞死組織或病灶清除材料。(3)粘膜部位的感染灶取得的材料。(4)從腦、肺、肝或其他器官的膿腫或從腹腔內、肛周、隔下或其他部位的膿腫取得的材料。(5)無菌區感染灶的吸出液,包括血液、腦脊液、腹水、胸水、滑膜液或羊水等。(6)人或動物咬傷感染灶取得的材料。(7)變黑的或置于紫外線發紅色熒光的滲出物。(8)革蘭染色鏡下,觀察到具有厭氧菌*形態的材料。(9)可疑引起肉毒桿菌食物中毒的食物。
收集標本及運送對厭氧菌培養能否成功至關重要,須注意:標本不能被正常菌群污染;應盡量避免接觸空氣。
正確地收集標本:厭氧菌是人體許多部位(如皮膚、口咽部、腸道和泌尿生殖道)正常菌群中的一部分,因此下列材料無需做厭氧培養:(1)咽、鼻、尿道、陰道或直腸拭子、牙拭子。(2)咳出的痰,通過支氣管鏡取的分泌物,排出或導出的尿、糞便及胃內容物。(3)前列腺分泌物。為排除或盡量減少正常菌群中厭氧菌的污染,用注射器抽取標本比用拭子更好,特別適用于下列臨床情況:(1)從未開放的膿腫抽取膿液。(2)通過胸腔穿刺抽出的胸腔液。(3)尿(從恥骨聯合上方做膀胱穿刺吸出或從腎造口管收集)。(4)肺分泌物(氣管切開吸取)。(5)腹腔液(穿刺抽出)。(6)通過腰椎穿刺抽出腦脊液。(7)竇道標本可插入小導管,用注射器吸出。也可自竇道損傷部位取材做活組織檢查。注射器和針頭內的氣體應全部排出,針頭插入無菌橡皮塞,隔絕空氣,即可送到實驗室。如果必須使用拭子,應盡快接種于適宜培養基中。在運送過程中要保持厭氧狀態。培養基內不應含有肝素,因它會抑制細菌生長。
實驗室接到標本后,在20~30分鐘內接種標本于厭氧培養基,并放入厭氧箱內進行培養,置于37℃箱內培養2~7天,每天觀察培養基上菌落生長情況,血液等液體直接接種于血液檢測儀培養基,血液檢測儀能快速檢出血液中厭氧菌。挑取可疑菌落作鑒定與藥敏試驗,使用微量生化系統鑒定待測菌或冷藏長期存儲。
厭氧菌作為重要的條件致病菌,所致感染已日益受到關注。很多醫院微生物室(深圳第二人民醫院、深圳港大醫院、深圳福田醫院、深圳骨科醫院、深圳孫逸仙醫院、廣東省人民醫院、中山大學附屬口腔醫院、中山大學附屬*醫院、中山大學附屬第六醫院、南方醫院、廣州醫學院附屬醫院、廣州市第二人民醫院、廣州第八人民醫院等等)與深圳華大基因研究院等機構合作開展厭氧菌鑒定與藥敏試驗,迅速協助臨床對厭氧菌感染及時作出診斷與選擇有效的用藥方案。
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