產品名稱：PPM^TM - Plant Preservative Mixture（植物組織培養抗菌保護劑）

貨號：PPM

保存條件：4º C

運輸條件：常溫

物理性質：溶液

性狀：無色至琥珀色透明液體

pH值：3.8

有效期：見瓶身標簽說明

產品描述：

1. PPM^TM 是一種熱穩定的抗菌劑，用于植物組織培養中植物的微生物污染防治與清除；
2. 在合理的使用劑量下，PPM^TM是一種非常有效的植物組培抗菌劑與保護劑，不會對植物的生長（如種子萌發，愈傷增殖、再生等）產生任何影響，可視為培養基標準配方成份；
3. PPM^TM主要用于預防和消除來自空氣、水源或者人體接觸等外界因素導致的植物組培過程中的微生物污染，同時，對于植物內生菌也同樣具有非常好的抑制效果；
4. PPM^TM廣泛適用于絕大多數被子植物和裸子植物，但是不推薦用于蕨類植物、藻類等水生植物；
5. PPM^TM具有熱穩定性，能直接加入培養基高溫滅菌而不會影響使用效果，使用更加方便；
6. PPM^TM 相對于常規抗生素而言，性價比更高。

作用機理：

PPM^TM的活性成分能滲透細菌或者真菌細胞壁，抑制呼吸作用中三羧酸循環和電子傳遞鏈過程中關鍵酶的活性，同時，也能阻斷細菌和真菌吸收和利用培養基中單糖和氨基酸的過程，從而實現預防和清除植物組織培養過程中的微生物污染。

相對抗生素的優勢：

1. PPM ^TM能廣泛抑制和清除細菌和真菌的污染，并防止真菌孢子的萌發；
2. PPM ^TM是通過抑制多種酶的活性而達到抑菌效果，從而能避免耐藥突變體的發生；
3. PPM ^TM具有熱穩定性，無需過濾滅菌，能直接加入培養基高溫滅菌而不會影響使用效果，使用更加方便；
4. PPM ^TM性價比更高，可更加廣泛的應用于更多的科學研究、作物育種、組培苗工廠化生產中。

產品說明：

PPM^TM - Plant Preservative Mixture是產品，其商品名稱，配方及使用方法等都受保護，號5,750,402。

常規使用簡介:

以下使用指南是針對大多數情況下的常規使用說明，特殊情況可做適當調整。

*說明：MS鹽溶液是泛指，如樣本的培養基鹽溶液不是MS鹽，以具體適用的培養基鹽溶液為準；

操作說明：

以下操作說明是針對大多數情況下的常規使用說明，必要時，可根據具體植物樣本情況進行適當調整，如需更多指導可Dr. Assaf Guri at guri1@erols.com。

1. 常規用量：
   一般推薦使用使用濃度為0.05%-0.2%（1L培養基中加入0.5-0.75ml PPM™），愈傷增殖，器官形成，胚性組織發育等使用濃度為0.05%-0.075%。

說明：
(a) 含有PPM™的培養基無需在超凈工作臺中分裝，在培養基凝固以后將培養瓶/皿蓋子蓋  

好即可。如使用自動灌裝系統，建議在灌裝前后將分裝管用高壓滅菌熱水處理；
(b) 如果培養基儲存液保存在無菌容器中并未經污染的情況下，加入PPM™配制的培養基

無需再次過濾或者高溫滅菌。如果是營養培養基，如含有200mg/L甚至更高濃度氨基酸或者蛋白質的培養基，建議過濾滅菌。

1. 植物內生菌污染處理：

(a) 種子：PPM™不推薦用于直接處理含有大量的細菌或真菌孢子的種子滅菌，對于種子離體萌發，建議先采用傳統方法消毒，然后置于含2-3%PPM™的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌4-12小時，此過程千萬不能添加Tween20和調節pH，處理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培養基里；

(b) 外植體：以1cm外植體為例，將外植體置于含4-5%PPM™的全培養基礎鹽溶液中，輕輕攪拌4-12小時，此過程千萬不能添加Tween20和調節pH，處理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培養基里；

(c) 對于塊莖，球莖和鱗狀物的觀賞植物樣本：將其整體放入消毒劑中攪拌消毒處理以后，用水沖洗干凈，將材料切成薄片，置于含4-5%PPM™的全培養基礎鹽培養液中，輕輕攪拌4-12小時，此過程千萬不能添加Tween20和調節pH，處理完成以后無需沖洗直接插入含有0.1-0.2%的PPM™的培養基里進行培養。

1. 如果厚的外植體、污染嚴重的植株、種子等樣本經過以上處理仍得不到理想效果，可嘗試以下操作：

(a) 將材料浸泡在水中持續攪拌處理(松軟組織攪拌1小時，硬實組織攪拌2小時)；

(b) 將材料在含50%的PPM™全培養基礎鹽溶液中攪拌處理5-10分鐘，此過程千萬不能添加Tween20和調節pH；

(c) 無需沖洗，將處理過的材料直接加入到培養基中即可。對于真菌污染，可在培養基中加入適當濃度的PPM™。對于真菌細菌混合性污染，建議在培養的*個月的培養基中加入0.05%-0.2%的PPM™。

1. 嚴重污染材料污染去除與搶救（重污染不超過一周）：

(a) 將污染的材料至于流水中用軟刷刷洗，然后置于含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘，對于細菌或者混合性污染，建議使用100% PPM™與0.6g/L的檸檬酸無菌水溶液按1：1混合的低pH(2.8-3.2)的酸性溶液處理；

(b) 處理后的材料無需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM™的培養基中培養至少一個月以上，其中前10天需要弱光培養；

對于一些真菌、孢子和細菌污染隱藏較深，PPM™無法接觸到的部位，建議在初步的清洗以后，將材料切開，然后再放入含50% PPM™的無菌水溶液中攪拌5-15分鐘處理。

1. 農桿菌的去除：

共培養以后，將樣本用無菌水清洗，然后將樣本浸沒在100% PPM™（補充4X的培養基鹽溶液）中處理2分鐘，取出后用無菌紙吸干后并置于常用抗性培養基中培養，3周后，更換到只含有0.05%-0.075% PPM™(無常用抗生素)的培養基中培養。

使用注意事項：

1. 在所有PPM™消毒處理外植體的過程中，盡量保證容器的體積足夠大，并使外植體材料所有面積與含PPM的處理溶液充分接觸，以保證消毒效果；
2. 如果外植體出現高度氧化現象，不要扔棄，大約50%的外植體在4-6周內即可恢復；
3. 50% PPM™ 的處理溶液可以重復使用但是不推薦，因為使用次數和效果受外植體的體積與接種密度的影響。將50% PPM™ 的處理溶液保存在4ºC 可適當延長其活性，一般可使用不超過10次。如果必要，建議配制2份50% PPM™ 溶液，一份用于外植體消毒內生菌污染，另一份用于消除“培養過程中”的輕度污染材料搶救，第二份溶液在每次處理過后需要用0.2mm濾器過濾；
4. 如果50% PPM™ 溶液處理效果不理想，可采用100% PPM™ 溶液進行處理，處理方法相同，但使用次數不得超過10次。

安全說明：

1. 雖然PPM™是無毒性的，但是在使用過程中還需盡量避免直接與人體皮膚等直接接觸，建議使用時佩戴手套，保持空間空氣流通，如不慎吸入，先馬上因大量純凈水后立即就醫，如不慎入眼，立刻用大量水沖洗眼睛15分鐘，用肥皂清洗PPM™接觸過的皮膚部位；

   2. 含PPM™的培養基垃圾處理與常規培養基處理方法相同。