Thermo液相色譜柱通常分為正相柱和反相柱。正相柱大多以硅膠為柱,或是在硅膠表面鍵合-CN,-NH3等官能團的鍵合相硅膠柱;反相柱填料主要以硅膠為基質,在其表面鍵合非極性的十八烷基官能團(ODS)稱為C18柱,其它常用的反相柱還有C8,C4,C2和苯基柱等。另外還有離子交換柱,GPC柱,聚合物填料柱等。
Thermo液相色譜柱優點是固定相穩定,應用廣泛,可使用多種溶劑。但硅膠為基質的填料,使用時一定要注意流動相的PH范圍。一般的C18柱PH值范圍都在2-8,流動相的PH值小于2時,會導致鍵合相的水解;當PH值大于7時硅膠易溶解;經常使用緩沖液固定相要降解。一旦發生上述情況,色譜柱人口處會塌陷。同樣填料各種不同牌號的色譜柱不盡相同。如果流動相PH較高或經常使用緩沖液時,建議選擇PH范圍大的柱子。
Thermo液相色譜柱如何選型:
在選擇Thermo液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質,他們的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等,
1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或硅膠柱,HILIC(親水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱(缺點是離子對試劑平衡時間長,對流動相pH要求比較精密,否 則很難重復實驗,另外離子對試劑很難洗下來,基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗)
3. 若樣品是堿性的;可選擇高純硅膠柱(高純硅膠缺少金屬雜質,且硅膠端基封尾)或一些經過修飾的C18柱(如極性嵌入技術或堿去活技術等),他們都會減少堿性化合物的拖尾,一般會選擇中性或偏堿的條件下做,因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強,或堿性太強;可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(優點是方法開發簡單,缺點是目前實 現這一技術的色譜柱品牌比較少,價格也高)或者選用HILIC色譜柱(硅膠柱在反相條件下使用,這也是很經典的檢測堿性樣品的方法)選擇強離子交換柱(缺點 是不能用來分析其它樣品,對流動相pH要求比較精密,否則很難重復實驗)也有使用C18+強陰離子對試劑或強陰離子交換色譜柱。
Thermo液相色譜柱在使用前,進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件),只有這樣,測得的結果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
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