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半制備/制備型液相色譜柱的常見故障排除

閱讀:980      發布時間:2016-12-20
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  半制備/制備型液相色譜柱的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內, 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數, 在兩相中作相對運動時, 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程, 各組分在移動速度上產生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。


  半制備/制備型液相色譜柱柱接頭采用低死體積結構,柱接頭是兩端螺紋組件,一端是為7/16英寸內螺紋,另一端是3/16英寸的內螺紋(國內外已規范化)。7/16英寸內螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,中間放置壓環用于密封。3/16英寸的內螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,中間也放置壓環用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積,在安裝色譜柱時,用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環后要盡量插到底,然后再擰緊空心螺釘。壓環被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環后露出的管長度應嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。


  在兩端柱接頭內,柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網),用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失。空柱各組件均為316L不銹鋼材質,能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕。


  半制備/制備型液相色譜柱的常見故障排除:


  1、柱壓過高


  可能是微粒堵塞. 柱床膨脹,不可逆吸附, 細菌生長等造成的。也有可能是系統反壓問題, 例如阻尼器堵塞,進樣器堵塞, 管路或連接口堵塞. 在線過濾器不干凈, 壓力傳感器不準確等。


  2、柱效低


  可能是色譜柱被污染、 過濾片部分堵塞、色譜柱內的死體積造成,例如流動相p H值或者組成不合適造成固定相損失。 流動相急劇變化造成固定相物理損壞, 機械振動造成固定相產生裂縫,柱床收縮或干枯。


  也有可能是儀器連接的問題, 認真檢查進樣器、檢測器、 管路、 保護柱和在線過濾器等是否連接好,也可能是色譜柱沒有平衡好, 進樣量過大等問題。


  3、重復性差、不出峰、回收率低


  可能是色譜柱被污染, 流動相 p H值或者組成不合適造成固定相損失 , 樣 品溶劑 不同或樣品本身不穩定, 固定 相極性過強或者流動相極性過弱. 或者發生非特異性吸附。也可能梯度實驗時平衡時間不足,溫度波動, 流動相組成改變, 樣品溶劑不同, 樣品穩定性不好,方法的開發不好, 緩沖液的酸堿度不合適或者緩沖能力不足。

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