紫外-可見分光光度法

點擊次數：1301 發布時間：2014-11-19

紫外-　　紫外--可見分光光度法：是根據物質分子對波長為200-760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結構分析方法。操作簡單、準確度高、重現性好。波長長（頻率小）的光線能量小，波長短（頻率大）的光線能量大。分光光度測量是關于物質分子對不同波長和特定波長處的輻射吸收程度的測量。
　　描述物質分子對輻射吸收的程度隨波長而變的函數關系曲線，稱為吸收光譜或吸收曲線。紫外-可見吸收光譜通常由一個或幾個寬吸收譜帶組成。zui大吸收波長（λmax）表示物質對輻射的特征吸收或選擇吸收，它與分子中外層電子或價電子的結構（或成鍵、非鍵和反鍵電子）有關。朗伯-比爾定律是分光光度法和比色法的基礎。這個定律表示：當一束具有I0強度的單色輻射照射到吸收層厚度為b，濃度為c的吸光物質時，輻射能的吸收依賴于該物質的濃度與吸收層的厚度。其數學表達式為： 式中的A叫做吸光度；I0為入射輻射強度；I為透過吸收層的輻射強度；（I／I0）稱紫藤為透射率T；ε是一個常數，叫做摩爾吸光系數，ε值愈大，分光光度法測定的靈敏度愈高。
　　紫外-可見分光光度計由5個部件組成：    ①輻射源。必須具有穩定的、有足夠輸出功率的、能提供儀器使用波段的連續光譜，如鎢燈、鹵鎢燈（波長范圍350～2500納米），氘燈或氫燈（180～460納米），或可調諧染料激光光源等。②單色器[1]。它由入射、出射狹縫、透鏡系統和色散元件（棱鏡或光柵）組成，是用以產生高純度單色光束的裝置，其功能包括將光源產生的復合光分解為單色光和分出所需的單色光束。③試樣容器，又稱吸收池。供盛放試液進行吸光度測量之用，分為石英池和玻璃池兩種，前者適用于紫外到可見區，后者只適用于可見區。容器的光程一般為0.5～10厘米。④檢測器，又稱光電轉換器。常用的有光電管或光電倍增管，后者較前者更靈敏，特別適用于檢測較弱的輻射。近年來還使用光導攝像管或光電二極管矩陣作檢測器，具有快速掃描的特點。⑤顯示裝置。這部分裝置發展較快。較的光度計，常備有微處理機、熒光屏顯示和記錄儀等，可將圖譜、數據和操作條件都顯示出來。
　　儀器類型則有：單波長單光束直讀式分光光度計，單波長雙光束自動記錄式分光光度計和雙波長雙光束分光光度計。
　　應用范圍包括：①定量分析，廣泛用于各種物料中微量、超微量和常量的無機和有機物質的測定。②定性和結構分析，紫外吸收光譜還可用于推斷空間阻礙效應、氫鍵的強度、互變異構、幾何異構現象等。③反應動力學研究，即研究反應物濃度隨時間而變化的函數關系，測定反應速度和反應級數，探討反應機理。④研究溶液平衡，如測定絡合物的組成，穩定常數、酸堿離解常數等。

 
熒光分析法　　利用某些物質被紫外光照射后所發生的能反映出該物質特性的熒光， 
　　可以進行定性或定量分析的方法。 
　　特點：靈敏度更高 10-10-10-12g/ml，應用不如UV廣泛。
　　應用：①直接熒光光度法
　　      ②作為HPLC的檢測器（用的多）